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【鐵皮石斛】
鐵皮石斛為蘭科植物鐵皮石斛 Dendrobiumoffi---cinale Kimuraet Migo 的干燥莖，具有益胃生津，滋陰清熱之功效，因其特殊的生存環(huán)境和卓著的滋補(bǔ)功效名列“中華九大仙草”之首。由于石斛藥材在化學(xué)成分和結(jié)構(gòu)組織上具有一定相似性，使鑒定和質(zhì)量評價工作較困難。目前常用的方法之一是高效液相色譜法，《中國藥典》2015 第一部規(guī)定：供試品色譜中，甘露糖與葡萄糖的峰面積比應(yīng)為（2.4~8.0）；所采用高效液相色譜的理論塔板數(shù)按甘露糖峰計算應(yīng)不低于4000；按干燥品計算，含甘露糖（CHO）應(yīng)為(13.0~38.0)%。
【樣品制備】
（校正因子計算） 取鹽酸氨基葡萄糖適量，配置成 1ml 含 12mg 的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取甘露糖對照品置于容量瓶中，加入內(nèi)標(biāo)溶液,加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取 400μl，加 入 PMP（1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮）甲醇溶液與氫氧化鈉溶液各 400μl，混勻，加熱水 浴反應(yīng)。再加鹽酸溶液混勻，用三氯甲烷洗滌，棄去三氯甲烷液，水層離心后，取上清液 10μl,注入測定，計算校正因子。
（鐵皮石斛樣品制備）取本品粉末 0.1219g,置提取器中，乙醇加熱回流提取，棄去乙醇液，藥淹揮干乙 醇，濾紙筒拆開置于燒杯中，加水再加入內(nèi)標(biāo)溶液，攪拌下煎煮小時，室溫加水、混勻，離 心，吸取上清液適量置頂空瓶中，加鹽酸溶液、封口，混勻、水解、放冷，用氫氧化鈉溶液 調(diào)節(jié) pH 值至中性，取上清液注入液相色譜儀，測定，即得。

【色譜條件】

液相色譜：sanotac LC1200高效液相色譜，色譜柱：kromasil C18柱

緩沖液：0.02mol/L 乙酸銨溶液
流動相：乙腈：緩沖液=20：80
流速：1.0ml/min；
進(jìn)樣量 20μL；
柱溫：室溫；
檢測波長：250nm

【結(jié)果分析】

對譜圖進(jìn)行積分，輸入內(nèi)標(biāo)物含量及甘露糖含量，由sanotac操作軟件直接獲取校正因子見下表:

組分名	保留時間	峰面積	峰高	濃度 （mg/ml）	校正因子
甘露糖對照品	14.34	932946	48310	0.098	0.5944
PMP	15.84	257741	5741
內(nèi)標(biāo)物	19.14	1118490	41883	0.12

對譜圖進(jìn)行積分，輸入內(nèi)標(biāo)物含量及甘露糖含量，由色譜軟件直接獲取甘露糖濃度見下表:

組分名	保留時間	峰面積	峰高	理論塔板數(shù)	濃度 （mg/ml）
甘露糖	14.36	2098964	107425	13378	0.2268
PMP	15.92	162863	3545
內(nèi)標(biāo)物	19.14	1087723	37885	0.12
葡萄糖	28.34	434464	12686

 
經(jīng)計算該鐵皮石斛樣品中甘露糖的含量為 18.61%，結(jié)果符合《中國藥典》2015 第一部“按干燥品計算，含甘露糖（CHO）應(yīng)為（13.0~38.0）%”的要求。