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       在用于分離、純化、制備復雜樣品時，Pilot制備液相色譜因其與傳統(tǒng)常壓過柱子相比有著明顯的優(yōu)勢，近年來在各大實驗室得到了越來越廣泛的應(yīng)用。配套采用小粒徑填料（5μm，10μm）的三為科學高壓制備色譜柱，使用人員可直接利用前期在分析柱上摸索出的合適分離方法進行線性放大，而無需從頭開發(fā)用于制備的分離方法，節(jié)省了方法開發(fā)過程中的大量人力物力財力。

       以常用的C18固定相柱為例，為盡可能簡化線性放大的調(diào)整過程，建議采用與分析柱同樣粒徑與長度的制備柱。

進樣量

三為科學高壓制備液相色譜柱的典型進樣量為填料裝填量（見表1）的0.2%~3%之間。若進樣量過小，樣品易吸附在柱上難以洗脫；若進樣量過大，部分樣品可能無法吸附而直接流出。

欲獲得制備柱對于某種樣品的理論進樣量，可根據(jù)前期在分析柱上摸索出的分離條件，經(jīng)計算得出制備柱的進樣量：

公式（1）中的分析柱進樣量一項可先參考分析柱的最大載量進行嘗試。由公式（1）可以看出，當制備柱與分析柱的柱長一致時，可簡化計算并一定程度上簡化放大操作的摸索、調(diào)整過程。

表1 三為科學高壓制備液相色譜柱參數(shù)一覽

*關(guān)于柱超載

       由于制備液相色譜與分析液相色譜的目的不同，即制備液相色譜在使用中為提高制備效率，操作過程中時常會涉及到柱超載：質(zhì)量超載或濃度超載，即保持較小的進樣體積，增加樣品濃度。一般認為單次處理的樣品量較小時可嘗試質(zhì)量超載；體積超載，即保持較小的樣品濃度，增加進樣體積。一般認為單次處理的樣品量較大時可嘗試體積超載。

       當涉及柱超載操作時，有以下幾點需注意：1、由于樣品內(nèi)不同組分間的相互作用，選擇何種超載操作需進行嘗試，以獲得可以接受的分離效果。2、柱超載程度需按樣品實際分離情況及各實驗室習慣用法而調(diào)整。3、線性放大理論不適用于柱超載操作。

流速

三為科學高壓制備液相色譜柱的典型流速范圍詳見表1。

同理，制備柱的實際流速可根據(jù)前期在分析柱上摸索出的分離條件進行大致計算：

公式（2）用于當制備柱與分析柱的填料粒徑一致時的情況，調(diào)整實際流速時請勿超壓。

梯度條件

當分離方法涉及梯度程序時，制備柱的梯度時間可根據(jù)分析柱方法的梯度時間進行大致計算：

由公式（3）可以看出，當制備柱與分析柱的柱長一致時，可簡化計算并一定程度上簡化放大操作的摸索、調(diào)整過程。

本文檔內(nèi)所有內(nèi)容皆為本公司內(nèi)部試驗數(shù)據(jù)，僅供參考。

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